生物工程学报

作者：肖锦宁，李小柯，庞敬莹，郭庆合，段良伟，赵永新，王向鹏

单位：1.河南医药大学 第三附属医院医学检验科，河南 新乡 453000;2.河南医药大学 医学技术学院，河南 新乡453000;3.河南医药大学 第一附属医院肿瘤内科，河南 卫辉 453100

关键词：G9P[8]型A组轮状病毒;VP7蛋白;多克隆抗体;免疫印迹;临床检测

基金：国家自然科学基金(81802837)；河南省高等学校重点科研项目(24B320015)

A组轮状病毒(group A rotavirus, RVA)是引起婴幼儿患急性胃肠炎的主要病原体之一。本研究旨在建立一种基于RVA VP7蛋白抗体的RVA免疫印迹(Western blotting)检测方法，用于RVA感染的诊断。首先对5株RVA新乡株进行全基因组测序和VP7基因遗传进化分析；构建VP7基因原核表达载体，并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达纯化VP7蛋白；随后免疫BALB/c小鼠制备抗VP7多克隆抗体，利用纯化的抗体作为检测抗体建立RVA的Western blotting检测方法，评估其特异性和敏感性；最后采用Western blotting与逆转录PCR (reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)方法对60份临床粪便标本检测，分析其符合率。结果显示，5株RVA新乡株均为G9P[8]型，其VP7基因序列同源性为100%，属于G9-Ⅵ谱系。本研究成功表达和纯化了VP7蛋白并制备了高效价的多克隆抗体，所建立的Western blotting检测方法可检测到G9P[8]型RVA，与人肠道腺病毒和人诺如病毒无交叉反应。敏感性试验结果表明抗体的最高有效稀释度为1:32 000。与RT-PCR方法相比，Western blotting检测方法具有较高的敏感性，阳性符合率为100%，阴性符合率为92.1%，总符合率为95%。综上所述，本研究建立的Western blotting检测方法具有较好的特异性和敏感性，为RVA感染的实验室诊断提供了一种检测手段，具有一定的临床应用前景。

来源：2026年第2期

《生物工程学报》期刊编辑部

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