生物工程学报

作者：申太霞，谭丽平，李佳慧，朱怡然，黄翊珂，侯勇

单位：西南大学 西部(重庆)科学城种质创制大科学中心，重庆 400715

关键词：家蚕(Bombyx mori);几丁质结合蛋白;蛋白质纯化;绿色荧光蛋白(EGFP);吸附率

基金：国家自然科学基金(32573299)；重庆市商务委员会茧丝绸发展项目(20250313082842072)；重庆市自然科学基金(CSTB2025NSCQ-LZX0025)

昆虫中存在多种几丁质结合蛋白。其中，含有ChtBD2几丁质结合域的CPAP3蛋白家族是昆虫表皮中含量最为丰富的蛋白质种类之一，本研究旨在以昆虫几丁质结合蛋白为标签蛋白，探讨其在蛋白纯化领域的应用潜力，同时探究CPAP3蛋白结构域数量与其结合能力的关系。利用家蚕CPAP3-A蛋白(简称CPAP3)作为标签蛋白，以绿色荧光蛋白EGFP为目标蛋白，构建融合表达体系实现二者融合表达。以几丁质/壳聚糖材料作为固定相，通过结合实验验证融合蛋白的结合能力。结果显示，融合蛋白CPAP3-EGFP与4种不同的几丁质/壳聚糖均能发生结合。正交实验表明最佳结合条件为β-几丁质、结合缓冲液pH值6.5，此时吸附率高达70.44%左右。为进一步探究结构域数量与结合能力的关系，对CPAP3蛋白进行了截短处理。结果表明，含有3个结构域的蛋白结合能力显著高于其他2个截短组，说明蛋白标签的结合能力与结构域数量呈正相关。为了有效释放结合在几丁质上的目标EGFP蛋白，在目的蛋白与标签蛋白之间引入了TEV蛋白酶切序列。实验结果显示，TEV蛋白酶酶切后，蛋白在28 kDa处出现了新的条带，证实融合蛋白能够被TEV酶切开，目标蛋白得以释放至溶液上清中。本研究为昆虫几丁质结合蛋白作为亲和标签的应用提供了参考。

来源：2026年第4期

《生物工程学报》期刊编辑部

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