生物工程学报

作者：杨倩倩，廖焕程，石正旺，罗俊聪，陈婕，张帆，王琳，谢亚格，周正，武嘉惠，田宏，郑海学

单位：1中国农业科学院兰州兽医研究所 动物疫病防控全国重点实验室，甘肃 兰州 730000;2兰州大学 动物医学与生物安全学院，甘肃 兰州 730000

关键词：羊副流感病毒3型;N基因;双抗原夹心ELISA;原核表达

基金：甘肃省科技重大专项(23ZDNA007)；2022甘肃省创新联合体项目(22ZD6NA012)；中国农业科学院创新计划(CAAS-CSLPDCP-202302)

本研究旨在建立一种双抗原夹心ELISA方法，用以检测羊副流感病毒3型血清抗体，以支持羊副流感病毒3型血清抗体感染临床诊断。合成N基因(NCBI数据库登录号：MT756864.1)并构建至pET-30a中，命名为pET-30a-N，利用大肠杆菌原核表达、亲和层析纯化N蛋白。用间接ELISA方法和Western blotting方法验证N蛋白反应性。用凝血酶(1:1 000，W/W)酶切N蛋白His标签。通过优化抗原包被浓度、酶标抗原稀释比例、血清稀释比例等条件，最终建立用于检测临床样本羊副流感病毒3型血清抗体的双抗原夹心ELISA方法。结果发现，间接ELISA方法和Western blotting方法鉴定N蛋白具有良好的反应性。N蛋白His标签成功切除，且酶切后的N蛋白反应性未改变。通过棋盘法得到最佳抗原包被浓度为0.5 μg/mL；HRP酶标抗原稀释度为1:10 000；血清最佳稀释比例1:20；双抗原夹心ELISA临界值为0.237；与口蹄疫病毒O型(foot-and-mouth disease virus, FMDV-O)、羊痘病毒(sheep/goat pox virus, GTPV)、羊口疮病毒(orf virus, ORFV)、布鲁氏菌(Brucella)的抗体阳性血清均无交叉反应，与商品化试剂盒相比较敏感性高达1:512；批间和批内的变异系数均小于10%。用本研究建立的方法与圣博羊间接ELISA试剂盒同时对150份田间羊临床血清进行检测，两者的符合率为87%。本研究所建立的双抗原夹心ELISA方法具备特异性强、敏感性高、重复性好等特点，为羊副流感病毒3型血清抗体大规模样品监测、血清学调查、疫病防控提供了有效的技术手段。

来源：2026年第4期

《生物工程学报》期刊编辑部

查看生物工程学报杂志2026年第4期