生物工程学报

作者：朱昱茜，何印娣，石正旺，罗俊聪，席韬，张帆，石鑫泰，李帅鹏，郑海学，田宏

单位：1中国农业科学院兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室，甘肃 兰州 730046;2甘肃农业大学 动物医学院，甘肃 兰州 730070

关键词：EGFP蛋白;细胞融合;单克隆抗体;亲和力;表面等离子共振

基金：国家自然科学基金(32330107)； 国家重点研发计划(2021YFD1800300)；国家生猪产业技术体系(CARS-35)；国家生猪技术创新中心(NCTIP-XD/C03)

为制备高特异性和亲和力的EGFP单克隆抗体(monoclonal antibody, mAb)，本研究以纯化的EGFP蛋白为抗原，经弗氏佐剂乳化后免疫Balb/c小鼠，将小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，应用间接ELISA方法筛选阳性孔并利用有限稀释法进行亚克隆，获得稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株。采用叠加试验、亚型鉴定、Western blotting及表面等离子体共振(surface plasmon resonance, SPR)技术，系统分析抗体的表位特异性、反应性及亲和力。结果发现，本研究成功筛选出2株能稳定分泌特异性针对EGFP蛋白单抗的杂交瘤细胞株1F11和3C11，其亚型分别为IgG2a和IgG2b；叠加试验显示叠加系数(additivity index, AI)大于40%，说明两者识别不同抗原表位；抗体效价检测发现效价均可达1:512 000；Western blotting分析证实其可特异性识别大小约为27 kDa的EGFP蛋白；SPR分析测得亲和力常数分别为3.806×10 ^-10 mol/L和2.631×10 ^-10 mol/L，均属于高亲和力水平。由此可见，本研究制备的mAbs具有良好的特异性、反应性及高亲和力，为EGFP标记蛋白的免疫学检测及疫苗株体内监测提供了特异性的重要生物工具。

来源：2026年第4期

《生物工程学报》期刊编辑部

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